附件：異常凝血酶原檢測試劑非臨床研究審評要點（2025年第15號）.doc

異常凝血酶原檢測試劑
非臨床研究審評要點

本審評要點主要針對異常凝血酶原（PIVKA-II）檢測試劑的分析性能、陽性判斷值與參考區(qū)間、穩(wěn)定性、主要原材料等研究過程，為體外診斷試劑注冊申請人和技術(shù)審評部門提供參考。

本審評要點是對異常凝血酶原檢測試劑的一般要求，注冊申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進(jìn)行充實和細(xì)化。

本審評要點是供注冊申請人和技術(shù)審評人員使用的指導(dǎo)性文件，但不包括審評審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本審評要點。如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗證資料。

本審評要點是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，相關(guān)內(nèi)容也將適時進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

本審評要點適用于體外定量測定人血清和血漿中的異常凝血酶原（PIVKA-II）檢測試劑。產(chǎn)品用于臨床肝細(xì)胞癌（HCC）疑似患者的輔助診斷，以及動態(tài)監(jiān)測以輔助判斷疾病進(jìn)程或治療效果。

本審評要點是對基于免疫學(xué)方法的異常凝血酶原（PIVKA-II）檢測試劑的一般要求，對于包含PIVKA-II的聯(lián)合檢測產(chǎn)品，可能部分要求不完全適用或本文所述內(nèi)容不夠全面，申請人可以參照本審評要點，根據(jù)產(chǎn)品特性對適用部分進(jìn)行評價，并補(bǔ)充其他的評價資料進(jìn)行相應(yīng)驗證。

本審評要點適用于進(jìn)行產(chǎn)品注冊和變更注冊申報的產(chǎn)品。

二、注冊審查要點

（一）監(jiān)管信息

1.產(chǎn)品名稱及分類編碼

產(chǎn)品名稱應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》及相關(guān)法規(guī)的要求，如異常凝血酶原測定試劑盒（化學(xué)發(fā)光法）。按照《體外診斷試劑分類規(guī)則》和《體外診斷試劑分類目錄》，該產(chǎn)品管理類別為Ⅲ類，分類編碼為6840。

2.注冊申請人還需提交產(chǎn)品列表、關(guān)聯(lián)文件、申報前與監(jiān)管機(jī)構(gòu)的聯(lián)系情況和溝通記錄及符合性聲明等文件。

（二）綜述資料

內(nèi)容應(yīng)符合《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》的相關(guān)要求，主要包括概述、產(chǎn)品描述、預(yù)期用途、申報產(chǎn)品上市歷史及其他需說明的內(nèi)容。建議注冊申請人著重介紹產(chǎn)品檢驗原理，抗體、抗原等主要原材料選擇，與同類和/或前代產(chǎn)品的量值比較，及產(chǎn)品的預(yù)期用途。

（三）非臨床資料

1.產(chǎn)品技術(shù)要求及檢驗報告

1.1 產(chǎn)品技術(shù)要求

申請人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)產(chǎn)品研制、前期評價等結(jié)果，依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻(xiàn)資料，結(jié)合產(chǎn)品特性按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（2022年第8號）的要求編寫產(chǎn)品技術(shù)要求。該類產(chǎn)品作為三類體外診斷試劑，附錄中需包含主要原材料及生產(chǎn)工藝要求的內(nèi)容。

如有適用的國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)不低于標(biāo)準(zhǔn)的要求。

1.2產(chǎn)品檢驗報告

根據(jù)《體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》的要求，申請人應(yīng)當(dāng)提供三個不同生產(chǎn)批次產(chǎn)品的檢驗報告，有適用的國家標(biāo)準(zhǔn)品的，應(yīng)當(dāng)使用國家標(biāo)準(zhǔn)品對產(chǎn)品進(jìn)行檢驗。報告形式可為申請人出具的自檢報告或委托有資質(zhì)的醫(yī)療器械檢驗機(jī)構(gòu)出具的檢驗報告。申請人開展自檢的，應(yīng)當(dāng)符合《醫(yī)療器械注冊自檢管理規(guī)定》及相關(guān)法規(guī)的要求。

2.分析性能研究

注冊申請人應(yīng)當(dāng)在原材料和生產(chǎn)工藝經(jīng)過選擇和確認(rèn)、質(zhì)量管理體系得到有效控制并且保證產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定的基礎(chǔ)上，采用完整、確定的檢測系統(tǒng)進(jìn)行分析性能評估，提供具體研究目的、試驗方法、相關(guān)基本信息、原始數(shù)據(jù)和數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析過程及結(jié)果。

如果試劑適用不同的機(jī)型，需要在不同機(jī)型上分別進(jìn)行分析性能評估（建立/驗證）。如申報產(chǎn)品包含不同的包裝規(guī)格，需要對各包裝規(guī)格進(jìn)行分析或驗證。

產(chǎn)品分析性能研究主要包括樣本穩(wěn)定性、適用的樣本類型，校準(zhǔn)品溯源和質(zhì)控品賦值，正確度，精密度，空白限、檢出限及定量限，測量區(qū)間及可報告區(qū)間，分析特異性，高劑量鉤狀效應(yīng)的研究等。

2.1樣本穩(wěn)定性

建議充分考慮實際使用過程中樣本采集、處理、運輸及保存等各個階段的條件（常溫、冷藏和冷凍等），進(jìn)行保存期限驗證，以確認(rèn)樣本的保存條件及保存時間。可冷凍保存的樣本還應(yīng)對凍融次數(shù)進(jìn)行合理驗證。

2.2適用的樣本類型

如同時適用于血清和血漿樣本（不同抗凝劑），應(yīng)采用合理方法評價樣本類型的適用性。可選擇具有統(tǒng)計學(xué)意義數(shù)量的樣本，進(jìn)行一致性的同源比對研究。

血清和血漿樣本結(jié)果不一致時，應(yīng)分別進(jìn)行性能研究，以及陽性判斷值與參考區(qū)間研究。

2.3 校準(zhǔn)品溯源和質(zhì)控品賦值

應(yīng)明確申報產(chǎn)品適用的校準(zhǔn)品和質(zhì)控品。

如申報產(chǎn)品包含校準(zhǔn)品，應(yīng)當(dāng)提交溯源資料。

該類產(chǎn)品目前無國家/國際標(biāo)準(zhǔn)品，也無國際約定參考測量程序，一般溯源到制造商選定測量程序、內(nèi)部參考測量程序或企業(yè)校準(zhǔn)品。部分產(chǎn)品溯源到純化的重組異常凝血酶原。如無充分的方法學(xué)比對研究數(shù)據(jù)，不建議將不同的結(jié)果濃度單位進(jìn)行換算。

如申報產(chǎn)品包含質(zhì)控品，應(yīng)當(dāng)提交賦值資料。

2.4正確度

建議采用申報產(chǎn)品和已上市同類試劑進(jìn)行方法學(xué)比對研究。研究人群包括產(chǎn)品的適用人群。臨床樣本的濃度水平應(yīng)覆蓋申報試劑的測量區(qū)間。在性能建立時，建議對每個樣本重復(fù)檢測，以平均值或中位數(shù)進(jìn)行回歸分析，并評價醫(yī)學(xué)決定水平或參考區(qū)間上限濃度的偏倚。

2.5精密度

應(yīng)根據(jù)各測量條件對檢測結(jié)果影響程度的分析，設(shè)計合理的精密度試驗方案進(jìn)行評價，包括重復(fù)性、實驗室內(nèi)精密度、實驗室間精密度和批間精密度，應(yīng)制定合理的精密度評價標(biāo)準(zhǔn)，如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)等。

精密度研究用樣本一般為臨床實際檢測樣本或其混合物。樣本濃度一般包括測量區(qū)間高、中、低在內(nèi)的3～5個水平，應(yīng)有醫(yī)學(xué)決定水平或參考區(qū)間上限濃度附近的樣本。

2.6空白限、檢出限及定量限

該類試劑對樣本濃度下限的檢出能力指標(biāo)包括空白限（LoB）、檢出限（LoD）及定量限（LoQ）。LoB一般由多個獨立的空白樣本（無異常凝血酶原）的檢測結(jié)果計算獲得；LoD一般由多個獨立的低濃度（含有異常凝血酶原）樣本的檢測結(jié)果，結(jié)合LoB進(jìn)行計算獲得。LoQ需滿足預(yù)設(shè)準(zhǔn)確度指標(biāo)（即考慮偏倚和精密度的要求）或者精密度指標(biāo)（無法確定偏倚時）。該部分研究包括建立和驗證兩部分內(nèi)容。

2.7測量區(qū)間及可報告區(qū)間

2.7.1線性區(qū)間及測量區(qū)間

線性區(qū)間的研究，需采用高值和零濃度/低值樣本配制一系列不同濃度的樣本。當(dāng)建立試劑的線性區(qū)間時，需配制較預(yù)期線性區(qū)間更寬的至少9個不同濃度的樣本（不包括零濃度樣本），每個樣本進(jìn)行多次重復(fù)檢測。采用重復(fù)檢測均值和預(yù)期值進(jìn)行直線回歸分析，建議采用加權(quán)最小二乘回歸等分析方法，提供散點圖、線性回歸方程、線性相關(guān)系數(shù)（r）及線性偏差，判斷結(jié)果是否滿足可接受標(biāo)準(zhǔn)。

線性區(qū)間的研究建議包括建立和驗證兩部分內(nèi)容。

2.7.1可報告區(qū)間

如對超出測量區(qū)間濃度的樣本可進(jìn)行稀釋后檢測，應(yīng)研究合適的稀釋液和稀釋倍數(shù)。

2.8分析特異性

建議評估的內(nèi)源性干擾物質(zhì)包括血紅蛋白、血脂、膽紅素、自身抗體(RF、ANA)、異嗜性抗體（人抗鼠抗體）、凝血酶原、IgG、IgA、IgM、白蛋白、葡萄糖、半乳糖等。建議評估的外源性干擾物質(zhì)為常用藥物（例如：華法林、維生素K、抗壞血酸、維生素B、布洛芬、對乙酰氨基酚、地塞米松、乙酰水楊酸、抗生素等）、乙肝、丙肝等肝臟疾病治療相關(guān)藥物（例如：干擾素α、恩替卡韋、利巴韋林、艾米替諾福韋、索磷布韋維帕他韋等），肝細(xì)胞癌治療相關(guān)藥物。

還應(yīng)評估其他腫瘤標(biāo)志物的干擾，如甲胎蛋白、甲胎蛋白異質(zhì)體、癌胚抗原、α-L-巖藻糖苷酶、糖類抗原19-9、糖類抗原50、人絨毛膜促性腺激素（β-HCG）等。

如果試劑采用了生物素-親和素系統(tǒng)，需對生物素的干擾進(jìn)行研究。

干擾研究中需采用至少2個分析物水平的樣本，包括陽性判斷值或參考區(qū)間上限附近濃度的樣本。研究的干擾物質(zhì)需選擇臨床樣本中的最高濃度（最差情形）。

2.9高劑量鉤狀效應(yīng)

當(dāng)檢測含有極高濃度的異常凝血酶原樣本時，飽和反應(yīng)可能導(dǎo)致檢測濃度值低于真實值。建議對多個含有高濃度分析物的真實樣本進(jìn)行梯度稀釋后由低濃度至高濃度檢測，每個梯度的稀釋液重復(fù)多份進(jìn)行檢測，明確不產(chǎn)生鉤狀效應(yīng)的最高分析物濃度。

2.10反應(yīng)體系研究

2.10.1確定抗原抗體反應(yīng)條件（溫度、時間等）的研究資料。

2.10.2確定反應(yīng)所需物質(zhì)用量（校準(zhǔn)品、樣本、包被物、酶標(biāo)物、底物等）的研究資料；如樣本需采取稀釋或其他必要的方法進(jìn)行處理后方可用于最終檢測，申請人還應(yīng)對樣本稀釋液及其用量、其他必要的處理方法等進(jìn)行研究。

2.10.3底物（發(fā)光或變色）的最適條件研究。

2.10.4其他：如清洗次數(shù)（如適用）、樣本稀釋等。

2.10.5不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述。

3.穩(wěn)定性研究

穩(wěn)定性研究主要包括實時穩(wěn)定性（貨架有效期）、使用穩(wěn)定性（包括試劑開封穩(wěn)定性、校準(zhǔn)頻率）、運輸穩(wěn)定性等，申請人可根據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料一般包含研究方案、報告和數(shù)據(jù)。對于實時穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少3批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

4.陽性判斷值與參考區(qū)間研究

異常凝血酶原檢測試劑為定量檢測試劑，一般需要采用健康人群樣本確定試劑的參考區(qū)間。參考群體的選擇應(yīng)考慮是否依據(jù)年齡、性別等因素進(jìn)行分組。如果不同組之間的差別具有統(tǒng)計學(xué)意義，需要分別進(jìn)行統(tǒng)計分析。

針對輔助診斷的預(yù)期用途，需要研究產(chǎn)品的陽性判斷值。陽性判斷值的研究需采用未經(jīng)治療的人群樣本，建議納入臨床確診的HCC病例組，良性肝病患者，除HCC以外的其他惡性腫瘤疾病患者，免疫疾病患者。HCC病例組可參考中國相關(guān)指南的分期方案，每個分期均應(yīng)有一定數(shù)量的病例，特別是早期人群應(yīng)納入充分的例數(shù)。良性肝病患者包括酒精性肝炎（ASH）、肝纖維化、肝硬化患者，乙肝感染患者，丙肝感染患者，非肝硬化非酒精性脂肪性肝炎（NASH）患者等人群。其他惡性腫瘤疾病患者包括膽管癌、胰腺癌、胃腸道癌癥患者等人群。對上述樣本的檢測結(jié)果，采用受試者工作特征曲線（ROC）的方式進(jìn)行陽性判斷值的分析，獲得本產(chǎn)品靈敏度和特異性最佳的診斷臨界值。

需要注意的是，異常凝血酶原在中外人群中可能存在差異，所以參考區(qū)間和陽性判斷值的研究，均需采用中國人群進(jìn)行。

為了保證產(chǎn)品陽性判斷值的科學(xué)性，建議采用與上述建立不同的樣本進(jìn)行陽性判斷值的驗證。

5.其他資料

5.1主要原材料研究資料

此類產(chǎn)品的主要原材料包括抗體、抗原、磁微粒、標(biāo)記物等，應(yīng)提供主要原材料的選擇與來源、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等相關(guān)研究資料。

5.1.1抗體

抗體用于檢測樣本中的異常凝血酶原，與被測物直接結(jié)合，決定了試劑的靈敏度和特異性。請對抗體的選擇進(jìn)行充分研究。詳述抗體所針對的抗原表位、抗體制備所用免疫原以及確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)，明確抗體的來源、基本信息（包括生物學(xué)來源，單克隆，簡述制備及鑒定方法）及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（可包括外觀、蛋白濃度、純度、分子量、效價、功能性試驗）。

5.1.2抗原

抗原用于校準(zhǔn)品和質(zhì)控品的制備，明確抗原的來源，基本信息（包括天然抗原/重組抗原及表達(dá)載體，簡述制備及鑒定方法）及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（可包括外觀、蛋白濃度、純度、分子量、功能性試驗）。

5.1.3其他

除上述原材料外，產(chǎn)品中包含的其他原材料，如磁微粒、標(biāo)記物、生物素、鏈霉親合素等，均應(yīng)進(jìn)行驗證并提交相關(guān)資料。

5.2 生產(chǎn)工藝

介紹產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝，可用流程圖結(jié)合文字的方式表述，提交主要生產(chǎn)工藝的確定及優(yōu)化研究資料。