附件：高危型人乳頭瘤病毒（HPV）核酸檢測及基因分型試劑注冊審查指導(dǎo)原則（2025年修訂稿）（2025年第16號）.doc

高危型人乳頭瘤病毒（HPV）核酸檢測及
基因分型試劑注冊審查指導(dǎo)原則
（2025年修訂稿）

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對高危型人乳頭瘤病毒（HPV）核酸檢測及基因分型試劑注冊申報資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門審評注冊申報資料提供參考。

本指導(dǎo)原則是針對高危型人乳頭瘤病毒（HPV）核酸檢測及基因分型試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供申請人和審查人員使用的指導(dǎo)性文件，不涉及注冊審批等行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

本指導(dǎo)原則適用于高危型人乳頭瘤病毒（HPV）核酸檢測及基因分型試劑注冊申請和變更注冊申請的情形。本指導(dǎo)原則針對高危型人乳頭瘤病毒（HPV）核酸檢測及基因分型試劑注冊申報資料中的部分內(nèi)容進(jìn)行撰寫，其他未盡事宜應(yīng)當(dāng)符合《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》等相關(guān)法規(guī)要求。

本文所述高危型人乳頭瘤病毒（HPV）核酸檢測及基因分型試劑是指利用包括PCR-熒光探針法或其他分子生物學(xué)方法在內(nèi)的核酸檢測技術(shù)，以特定高危型HPV核酸（包括DNA和RNA）序列為檢測目的，對人宮頸脫落上皮細(xì)胞進(jìn)行體外定性檢測的試劑，以確定受試樣本中是否存在高于陽性判斷值水平的高危型HPV病毒，或同時鑒定感染HPV的基因型別。此類試劑在臨床上用于：（1）篩查宮頸細(xì)胞學(xué)檢查為ASC-US（意義未確定的非典型鱗狀上皮細(xì)胞）結(jié)果的患者，以確定是否需要進(jìn)行陰道鏡檢查（以下簡稱ASC-US人群分流用途）；（2）對于30歲及以上的女性，通過檢測是否有高危型HPV感染，與宮頸細(xì)胞學(xué)檢查聯(lián)合進(jìn)行宮頸癌篩查，此檢測結(jié)合細(xì)胞學(xué)病史和其他風(fēng)險因素的評估、以及臨床診療和篩查指南的要求，用于指導(dǎo)患者的管理(以下簡稱宮頸癌聯(lián)合篩查用途)；（3）對于某年齡段（根據(jù)臨床試驗(yàn)結(jié)果而定）女性，通過檢測是否有高危型HPV感染，進(jìn)行宮頸癌篩查，此檢測結(jié)合細(xì)胞學(xué)病史和其他風(fēng)險因素的評估、以及臨床診療和篩查指南的要求，用于指導(dǎo)患者的管理（以下簡稱宮頸癌初篩用途）。除此以外，若申請人提出其他的預(yù)期用途，則應(yīng)詳細(xì)描述相關(guān)的臨床背景信息和該檢測與臨床用途的相關(guān)性，并在臨床試驗(yàn)中充分驗(yàn)證相關(guān)的臨床意義。本指導(dǎo)原則僅針對上述三種預(yù)期用途提出相關(guān)要求。

這里所述的高危型HPV核酸檢測試劑是指可同時檢測多種高危型HPV但不能對陽性結(jié)果進(jìn)行基因分型的試劑，高危型HPV基因分型試劑是指檢測多種高危型HPV的同時可以對HPV陽性結(jié)果進(jìn)行基因分型的試劑。

本指導(dǎo)原則適用的檢測方法主要指基于核酸檢測的分子生物學(xué)技術(shù)。如：雜交捕獲法、酶切信號放大法、PCR-熒光探針法、熒光PCR熔解曲線法、轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)的核酸擴(kuò)增技術(shù)以及高通量測序技術(shù)等。這些方法在性能評價上可能會略有差異，但在技術(shù)指標(biāo)方面均適用于本指導(dǎo)原則，以下有關(guān)注冊申報資料的要求主要針對PCR-熒光探針法提出，其他方法學(xué)試劑應(yīng)針對產(chǎn)品自身特點(diǎn)進(jìn)行相應(yīng)補(bǔ)充或修正。

二、注冊審查要點(diǎn)

（一）通用要求

關(guān)于本指導(dǎo)原則所述產(chǎn)品的預(yù)期用途還有以下幾點(diǎn)需要強(qiáng)調(diào)。第一，在年齡＜30歲的女性中，雖然HPV感染率很高，但其自主清除率也很高，因此對于細(xì)胞學(xué)檢查正常的受試者不建議再采用高危型HPV檢測做聯(lián)合篩查，在經(jīng)過臨床試驗(yàn)證實(shí)的基礎(chǔ)上亦可直接采用高危型HPV檢測作為初篩方法；此類高危型HPV核酸檢測試劑對不同年齡段人群的適用情況應(yīng)符合相關(guān)宮頸癌篩查指南的要求。第二，高危型HPV核酸檢測試劑用于ASC-US人群分流或?qū)m頸癌篩查時，其可覆蓋的HPV基因型別應(yīng)至少包含16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68型（共13種），產(chǎn)品亦可同時包含26、66、53、73、82型中的一個或數(shù)個型別。根據(jù)現(xiàn)有的研究成果，若可檢測的HPV基因型別不能涵蓋上述13種高危型，則可能造成陰性預(yù)期值無法達(dá)到臨床要求，因此不建議單獨(dú)用于上述預(yù)期用途。對于基因分型試劑，目前的研究數(shù)據(jù)已證實(shí)16、18型的基因分型檢測用于輔助（宮頸癌篩查中）高危型HPV核酸檢測陽性結(jié)果的分析是有臨床意義的，可以進(jìn)行注冊申請，如申報產(chǎn)品增加其他基因型分型，應(yīng)闡述其臨床意義，并提供相關(guān)臨床證據(jù)。第三，低危型HPV一般與尖銳濕疣或低度鱗狀上皮內(nèi)病變相關(guān)，在宮頸脫落上皮細(xì)胞中沒有明確的臨床意義，不適合與高危型HPV聯(lián)合檢測，在產(chǎn)品設(shè)計時，不應(yīng)將低危型與高危型檢測作為一個注冊單元。第四，鑒于此類試劑的樣本采集方法不利于量值溯源，無法保證定量檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，因此建議檢測試劑定位為定性檢測，本指導(dǎo)原則不適用于進(jìn)行定量或半定量HPV核酸檢測試劑的注冊；第五，根據(jù)目前相關(guān)診療指南要求，宮頸脫落細(xì)胞樣本應(yīng)采用宮頸采樣刷進(jìn)行樣本采集。最后，本指導(dǎo)原則只針對與宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌相關(guān)的高危型HPV檢測。

（二）監(jiān)管信息

1.產(chǎn)品名稱及分類編碼

產(chǎn)品名稱應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》及相關(guān)法規(guī)的要求，如高危型人乳頭瘤病毒(HPV)核酸檢測及16/18基因分型試劑盒(熒光PCR法)。根據(jù)《體外診斷試劑分類規(guī)則》，該產(chǎn)品按照第三類體外診斷試劑管理，分類編碼為6840-01-01130/01131。

2.其他信息還包括產(chǎn)品列表、關(guān)聯(lián)文件、申報前與監(jiān)管機(jī)構(gòu)的聯(lián)系情況和溝通記錄以及符合性聲明等文件。

（三）綜述資料

綜述資料主要包括概述、產(chǎn)品描述、預(yù)期用途、申報產(chǎn)品上市歷史及其他需說明的內(nèi)容。應(yīng)詳細(xì)說明產(chǎn)品所采用的技術(shù)原理及檢測流程。與已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行比較，比較內(nèi)容包括樣本類型、檢測原理、HPV基因型、檢測靶基因、分析性能和臨床性能等。

與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)證背景情況應(yīng)詳述高危型HPV核酸檢測和宮頸癌之間的相關(guān)性以及HPV檢測臨床應(yīng)用的限定要求。

（四）非臨床資料

1.產(chǎn)品技術(shù)要求及檢驗(yàn)報告

注冊申請人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)產(chǎn)品研制、前期評價等結(jié)果，依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻(xiàn)資料，結(jié)合產(chǎn)品特性按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》的要求編寫產(chǎn)品技術(shù)要求。該類產(chǎn)品作為第三類體外診斷試劑，應(yīng)當(dāng)以附錄形式明確主要原材料以及生產(chǎn)工藝要求。

高危型人乳頭瘤病毒（HPV）核酸檢測及基因分型試劑已有國家參考品的，技術(shù)要求中應(yīng)體現(xiàn)國家參考品的相關(guān)要求，并使用國家參考品對三批產(chǎn)品進(jìn)行檢驗(yàn)。

產(chǎn)品技術(shù)要求的相關(guān)要求應(yīng)不低于適用的國家參考品、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)相應(yīng)的要求。

2.分析性能研究

注冊申請人應(yīng)采用在符合質(zhì)量管理體系的環(huán)境下生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行所有分析性能研究，提交具體試驗(yàn)方案、試驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計分析結(jié)果及結(jié)論等詳細(xì)資料。

如申報產(chǎn)品適用不同的機(jī)型，需要對各機(jī)型間進(jìn)行差異分析（工作原理、檢測方法、反應(yīng)條件控制、信號處理等），并提交在不同機(jī)型上進(jìn)行性能評估的研究或驗(yàn)證資料。如申報產(chǎn)品包含不同的包裝規(guī)格，需要對各包裝規(guī)格間的差異進(jìn)行分析或驗(yàn)證。

分析性能評估所用樣本的基本信息均需明確，例如樣本來源、樣本類型、采集和處理方式、稀釋方式、陰陽性鑒定及濃度等。研究中采用的HPV陽性樣本，應(yīng)采用合理方法確定其陰陽性和濃度水平，并提交具體的試驗(yàn)資料。樣本的核酸性質(zhì)（DNA或RNA）應(yīng)與產(chǎn)品檢測的靶核酸一致。鑒于HPV病毒尚不能體外培養(yǎng)，可采用臨床樣本或感染HPV的細(xì)胞系，也可采用人工克隆或合成的HPV基因組DNA（或轉(zhuǎn)錄RNA）等。對于各項(xiàng)性能中采用的樣本，在下述各項(xiàng)性能研究資料中分別提供樣本信息列表。

申請人應(yīng)對不同的樣本保存液分別完成性能評估，包括檢出限和重復(fù)性等，證明不同的樣本保存液不會影響試劑的分析性能。

2.1樣本穩(wěn)定性

包括采集后未經(jīng)處理的樣本（如適用），加入樣本保存液的樣本，研究內(nèi)容包括室溫/冷藏/冷凍保存時間或凍融次數(shù)等。如適用不同的樣本保存液，應(yīng)分別進(jìn)行研究。

如樣本采集、處理后可不立即進(jìn)行檢測，還需對提取后核酸的保存條件和穩(wěn)定性進(jìn)行研究。
　  2.2適用的樣本類型

列明產(chǎn)品適用的樣本類型。

2.3準(zhǔn)確度

可采用企業(yè)參考品驗(yàn)證或方法學(xué)比對的方法進(jìn)行研究。

2.3.1企業(yè)參考品驗(yàn)證

根據(jù)主要原材料研究資料中的企業(yè)參考品設(shè)置情況，采用三批產(chǎn)品對企業(yè)參考品進(jìn)行檢驗(yàn)并提供詳細(xì)的試驗(yàn)數(shù)據(jù)。

2.3.2方法學(xué)比對研究

采用方法學(xué)比對的方式進(jìn)行研究，所用樣本類型應(yīng)與說明書聲稱的樣本類型一致，并涵蓋所有可檢測的HPV基因型。

2.4精密度

應(yīng)對精密度指標(biāo)，如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)等的評價標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求。應(yīng)考慮運(yùn)行、時間、操作者、儀器、試劑批次和地點(diǎn)等影響精密度的條件，設(shè)計合理的精密度試驗(yàn)方案進(jìn)行評價，例如：為期至少20天的檢測，具體方案可參考性能評價相關(guān)文件進(jìn)行。

精密度評價試驗(yàn)應(yīng)包含核酸分離/純化步驟，每一次檢測均應(yīng)從核酸提取開始。鑒于模擬樣本并不能體現(xiàn)臨床樣本可能帶來的所有變異因素，因此精密度評價中應(yīng)同時包含若干臨床樣本。精密度評價應(yīng)覆蓋檢測范圍內(nèi)的全部HPV基因型別，其中16/18型應(yīng)使用臨床樣本，其他HPV基因型可使用模擬樣本。

用于精密度評價的模擬樣本和臨床樣本均應(yīng)至少包含3個水平：陰性樣本、檢出限水平樣本、中/強(qiáng)陽性樣本，并根據(jù)產(chǎn)品特性設(shè)定適當(dāng)?shù)木芏纫螅纾?/p>

陰性樣本：不含待測物或待測物濃度為零時，陰性符合率應(yīng)為100%（n≥20）。

檢出限水平樣本：檢出限水平樣本陽性檢出率應(yīng)≥95%（n≥20）。

中/強(qiáng)陽性樣本：待測物濃度呈中度到強(qiáng)陽性，陽性符合率為100%且Ct值的CV≤5%（n≥20）。

2.5檢出限

建議采用梯度稀釋的方式進(jìn)行檢出限的確定，每個濃度梯度梯度的病毒稀釋液重復(fù)檢測，將具有95%陽性檢出率的最低濃度水平作為確定的檢出限。其中16/18型需使用臨床樣本進(jìn)行檢出限的驗(yàn)證。

應(yīng)對申報產(chǎn)品聲稱可檢測的HPV基因型分別進(jìn)行研究。申請人可采用數(shù)字PCR、標(biāo)準(zhǔn)曲線等方法進(jìn)行病毒核酸濃度的確定，應(yīng)提供檢出限研究用樣本的來源、型別確認(rèn)及病毒核酸濃度的確定方法及結(jié)果。可以copies/mL作為病毒核酸濃度的表示方式。

2.6分析特異性

2.6.1交叉反應(yīng)

應(yīng)針對預(yù)期用途不包含的其他HPV基因型，可在人類泌尿、生殖道寄生微生物，經(jīng)性傳播的其他病原體，其他常見病原體等進(jìn)行交叉反應(yīng)驗(yàn)證。用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的樣本，除HPV外的其他病原體應(yīng)盡量采用滅活病原體培養(yǎng)物或臨床樣本。建議在病毒和細(xì)菌感染的醫(yī)學(xué)相關(guān)水平進(jìn)行交叉反應(yīng)的驗(yàn)證。通常細(xì)菌感染的水平為106 CFU/mL或更高，病毒為105 PFU/mL或更高。如采用其他合理方法定值，應(yīng)為相當(dāng)?shù)臐舛取?/p>

首先應(yīng)在HPV病毒不同基因型間進(jìn)行交叉反應(yīng)驗(yàn)證，其次采用其他的病原微生物進(jìn)行驗(yàn)證（見附表1）。
　　應(yīng)提供所有用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病毒和細(xì)菌的來源、種屬/型別和濃度確認(rèn)等試驗(yàn)資料。有關(guān)交叉反應(yīng)驗(yàn)證的信息應(yīng)以列表的方式在產(chǎn)品說明書的【產(chǎn)品性能指標(biāo)】項(xiàng)中體現(xiàn)。

此外，建議針對被檢測靶序列與人基因組及可能存在于人類泌尿、生殖道的微生物基因組進(jìn)行基因序列比對，并提交比對結(jié)果，如有同源性序列則應(yīng)進(jìn)行交叉反應(yīng)驗(yàn)證。

2.6.2干擾試驗(yàn)

2.6.2.1內(nèi)源/外源物質(zhì)干擾
　　應(yīng)根據(jù)所采集樣本類型，針對可能存在的內(nèi)源/外源物質(zhì)干擾情況進(jìn)行驗(yàn)證。建議申請人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度（“最差條件”）條件下進(jìn)行評價，并針對代表性的HPV基因型（如16、18型），至少在HPV臨界陽性水平進(jìn)行干擾試驗(yàn)驗(yàn)證。干擾物質(zhì)的選取應(yīng)至少包括：血紅蛋白、白細(xì)胞、宮頸粘液、陰道避孕藥物、女性衛(wèi)生用品、陰道用抗真菌藥物、陰道潤滑劑等。對結(jié)果進(jìn)行合理的統(tǒng)計分析，對比添加干擾物質(zhì)前后的 Ct 值差異。

2.6.2.2病原體干擾

申請人應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品適用的樣本類型，充分考慮臨床上容易與HPV病毒合并感染的病原體及與檢測范圍內(nèi)的HPV基因型存在較高同源性的其他HPV基因型，在高濃度的情況下對低濃度（例如檢出限濃度）被測HPV基因型檢測的影響，進(jìn)行病原體的干擾研究。

2.6.2.3競爭性干擾

申請人應(yīng)充分考慮臨床上常見的HPV不同基因型混合感染的情況，評價高濃度基因型對低濃度基因型檢測的影響。建議申請人結(jié)合申報試劑的反應(yīng)模式，使用同一反應(yīng)體系內(nèi)一種基因型低濃度和其他基因型高濃度的情況評估競爭性干擾。競爭性干擾試驗(yàn)可與檢出限、重復(fù)性或其他干擾試驗(yàn)同時進(jìn)行。

2.7核酸提取/純化性能
　　在進(jìn)行核酸檢測之前，建議有核酸（DNA或RNA）提取/純化步驟。該步驟的目的除最大量分離出目的核酸外，還應(yīng)有相應(yīng)的純化作用，盡可能去除PCR抑制物。對配合使用的所有核酸提取試劑進(jìn)行提取核酸純度、濃度、提取效率及抗干擾的研究，必要時可考慮與質(zhì)量較好的核酸提取試劑進(jìn)行平行比對。若產(chǎn)品適用兩種或以上核酸提取試劑，則每一種核酸提取試劑均需配合檢測試劑進(jìn)行檢出限和精密度的驗(yàn)證。

2.8反應(yīng)體系

2.8.1樣本采集和處理

詳述樣本保存液、樣本采集方式的選擇和設(shè)置，提供相關(guān)的研究資料。如涉及不同的樣本采集方式需進(jìn)行檢測結(jié)果一致性的評價。

2.8.2核酸提取和反應(yīng)體系

研究確定最佳核酸提取和反應(yīng)體系，包括核酸提取用的樣本體積、洗脫體積和PCR反應(yīng)試劑和樣本體積、各種酶濃度、引物/探針濃度、dNTP濃度、陽離子濃度及反應(yīng)各階段溫度、時間、循環(huán)數(shù)等。

提交不同適用機(jī)型基線和閾值循環(huán)數(shù)的確定資料。

不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述，并提交驗(yàn)證資料。

3.穩(wěn)定性研究

申報試劑的穩(wěn)定性主要包括實(shí)時穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性、機(jī)載穩(wěn)定性（如適用）及凍融次數(shù)限制（如涉及）等研究，申請人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對于實(shí)時穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實(shí)際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

4.陽性判斷值研究

對于此類試劑，陽性判斷值即為能夠獲得理想的臨床靈敏度和臨床特異性的臨界值（Cut-off），例如對于熒光PCR法即為Ct值的確定資料。

樣本來源應(yīng)具有多樣性和代表性，考慮不同年齡、地域、不同時間和感染階段等因素，盡量納入含有干擾物質(zhì)和其他易引起交叉反應(yīng)病原體的樣本。建議采用受試者工作特征（ROC）曲線的方式進(jìn)行研究；如采用其他方法進(jìn)行研究，應(yīng)說明這種方法的合理性。如結(jié)果存在灰區(qū)，應(yīng)提供灰區(qū)的確認(rèn)資料。推薦申請人充分考慮產(chǎn)品用于分流、聯(lián)合篩查或初篩用途的性能，確定相應(yīng)的陽性判斷值。注意應(yīng)納入包含一定數(shù)量CIN2在內(nèi)的各種組織病理類型的樣本進(jìn)行研究。

提交陽性判斷值研究所用樣本的背景信息列表，至少包括樣本來源機(jī)構(gòu)、性別、年齡、臨床診斷信息、檢測結(jié)果等。

提供內(nèi)標(biāo)檢測結(jié)果范圍的確定方法和研究資料。

5.其他資料

5.1主要原材料研究資料

此類產(chǎn)品的主要原材料包括引物、探針、酶、dNTP、核酸分離/純化組分（如有）、質(zhì)控品及企業(yè)參考品等。應(yīng)提供主要原材料的選擇與來源、制備及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等的研究資料、質(zhì)控品的定值試驗(yàn)資料等。如主要原材料為企業(yè)自制，應(yīng)提供其詳細(xì)制備過程；如主要原材料源于外購，應(yīng)提供資料包括：選擇該原材料的依據(jù)及對比篩選試驗(yàn)資料、生產(chǎn)商提供的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢驗(yàn)報告，以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗(yàn)資料。生產(chǎn)商應(yīng)固定，不得隨意更換。

5.1.1引物和探針：應(yīng)詳述引物和探針的設(shè)計原則，提供引物、探針核酸序列、模板核酸序列及兩者的對應(yīng)情況。建議設(shè)計兩套或多套引物、探針以供篩選，針對所有檢測范圍內(nèi)的HPV基因型別進(jìn)行檢出能力和特異性（如交叉反應(yīng)）的評價，選擇最佳組合，并提交篩選的研究數(shù)據(jù)。引物、探針的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)至少包括序列準(zhǔn)確性、純度、濃度及功能性試驗(yàn)等。

5.1.2酶：需要的酶主要包括DNA聚合酶、尿嘧啶DNA糖基化酶等，應(yīng)分別對酶活性、熱穩(wěn)定性、功能性等進(jìn)行驗(yàn)證。

5.1.3脫氧三磷酸核苷（dNTP）：包括dATP、dGTP、dCTP、dTTP、dUTP，應(yīng)提供其純度、濃度、功能性等驗(yàn)證資料。

5.1.4質(zhì)控品（對照品）

試劑盒一般包含陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品。陽性質(zhì)控品的核酸性質(zhì)應(yīng)與待測樣本的靶核酸性質(zhì)一致，如同為DNA或RNA，其中可不包含所有檢測范圍內(nèi)的HPV基因型，但應(yīng)選擇臨床較常見的或風(fēng)險程度較高的基因型，至少包含16或18型。質(zhì)控品需參與樣本處理、核酸的平行提取和檢測的全過程，以對整個提取和PCR擴(kuò)增過程、試劑/設(shè)備、交叉污染等環(huán)節(jié)進(jìn)行合理質(zhì)量控制。應(yīng)對陽性的檢測結(jié)果（如Ct值）做出明確的范圍要求。提交質(zhì)控品的原料選擇、制備、定值等的試驗(yàn)資料。

5.1.5內(nèi)標(biāo)

內(nèi)標(biāo)（內(nèi)對照）可以對管內(nèi)抑制導(dǎo)致的假陰性結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制，應(yīng)與靶核酸共同提取及擴(kuò)增。需對內(nèi)標(biāo)的引物、探針設(shè)計和相關(guān)反應(yīng)體系的濃度做精確驗(yàn)證，既要保證內(nèi)標(biāo)熒光通道呈明顯的陽性曲線又要盡量降低對靶基因檢測造成的抑制。明確內(nèi)標(biāo)的檢測結(jié)果范圍。

5.1.6企業(yè)參考品

該類產(chǎn)品的企業(yè)參考品一般包括陽性參考品、陰性參考品、檢出限參考品和精密度參考品。企業(yè)參考品的核酸性質(zhì)（DNA或RNA）應(yīng)與產(chǎn)品檢測的靶核酸一致，可采用感染HPV的細(xì)胞系，也可采用人工克隆或合成的HPV基因組DNA（或轉(zhuǎn)錄RNA）等。企業(yè)參考品基質(zhì)需采用滅活臨床樣本。應(yīng)提交企業(yè)參考品的原料來源、選擇、制備、陰陽性及濃度確認(rèn)等試驗(yàn)資料。企業(yè)參考品的設(shè)置建議如下：

陽性參考品：無論試劑盒能否進(jìn)行HPV基因分型，均應(yīng)針對檢測范圍內(nèi)的全部HPV基因型分別設(shè)置。

陰性參考品：主要涉及對交叉反應(yīng)的驗(yàn)證，適當(dāng)納入其他HPV基因型樣本和其他生殖道病原體樣本。

檢出限參考品：可采用檢出限或略高于檢出限的濃度水平，應(yīng)針對檢測范圍內(nèi)的不同基因型分別設(shè)置。

精密度參考品：應(yīng)選擇臨床較常見的或風(fēng)險程度較高的基因型（至少包含16和18型）且包含每個反應(yīng)管的代表性基因型，可不包含檢測范圍內(nèi)的全部HPV基因型。至少設(shè)置弱陽性的濃度水平。

5.2生產(chǎn)工藝研究資料

介紹產(chǎn)品主要生產(chǎn)工藝，可用流程圖結(jié)合文字的方式表述。提交主要生產(chǎn)工藝的確定及優(yōu)化研究資料。

（五）臨床試驗(yàn)

該類試劑應(yīng)通過臨床試驗(yàn)路徑進(jìn)行臨床評價，臨床試驗(yàn)包括產(chǎn)品臨床檢測性能研究和針對預(yù)期用途的臨床有效性研究兩部分。臨床試驗(yàn)應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》《醫(yī)療器械臨床試驗(yàn)質(zhì)量管理規(guī)范》和《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，如相關(guān)法規(guī)、文件有更新，臨床試驗(yàn)應(yīng)符合更新后的要求。下面僅說明該類產(chǎn)品臨床試驗(yàn)中應(yīng)關(guān)注的重點(diǎn)問題。

1. HPV核酸臨床檢測性能研究設(shè)計

1.1臨床試驗(yàn)方法

申請人應(yīng)選擇已批準(zhǔn)上市、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品和/或核酸序列測定方法作為對比方法，采用擬申報產(chǎn)品與之進(jìn)行比較研究試驗(yàn)，以評價擬申報產(chǎn)品檢測目標(biāo)HPV基因型的能力。需要注意的是，當(dāng)擬申報產(chǎn)品的陽性判斷值高于最低檢測限水平時，檢測結(jié)果判定為“陰性”的情況包括兩種，其一為待測樣本中存在高于最低檢測限水平的HPV靶核酸，但靶核酸水平低于陽性判斷值；其二為待測樣本中無HPV靶核酸，或靶核酸水平低于最低檢測限水平。在檢測結(jié)果的統(tǒng)計分析中應(yīng)分別列明各種情況，可參考表1。

1.2臨床試驗(yàn)對比方法選擇

臨床試驗(yàn)應(yīng)選擇已上市的同類產(chǎn)品作為對比試劑，評價擬申報產(chǎn)品與已上市同類產(chǎn)品的一致性。對比試劑的選擇應(yīng)考慮產(chǎn)品預(yù)期用途、檢測的高危型人乳頭瘤病毒型別范圍、產(chǎn)品性能等方面應(yīng)與試驗(yàn)體外診斷試劑具有良好的可比性。針對不區(qū)分型別的檢測試劑，應(yīng)采用適當(dāng)?shù)姆椒ù_認(rèn)納入臨床試驗(yàn)的陽性病例樣本HPV型別；針對分型檢測試劑，對比方法應(yīng)能夠充分評價每個型別的臨床檢測性能。選擇已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行臨床試驗(yàn)時，對比試劑配套使用的核酸提取試劑應(yīng)滿足其說明書要求。

申請人亦可采用試驗(yàn)體外診斷試劑與核酸序列測定（Sanger測序）方法進(jìn)行對比試驗(yàn)，評價兩種檢測方法的一致性。同時還應(yīng)納入部分病例與已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行對比試驗(yàn)。以上兩方面評價結(jié)果結(jié)合起來共同論證試驗(yàn)體外診斷試劑的臨床性能。

臨床試驗(yàn)資料中應(yīng)對測序方法進(jìn)行詳細(xì)的介紹，應(yīng)采用公認(rèn)的靶基因進(jìn)行測序，針對靶基因的選擇應(yīng)提供依據(jù)。明確檢測過程中配套使用的核酸提取試劑，針對測序方法提交性能驗(yàn)證數(shù)據(jù)，證明測序方法與試驗(yàn)體外診斷試劑的可比性。如測序試驗(yàn)委托其他機(jī)構(gòu)完成，還應(yīng)提交由臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)委托第三方機(jī)構(gòu)/實(shí)驗(yàn)室開展相關(guān)試驗(yàn)的測序服務(wù)合同/協(xié)議。

有關(guān)核酸序列測定方法的資料要求：臨床試驗(yàn)中如涉及核酸序列測定方法，則建議對擴(kuò)增子進(jìn)行雙向測序。應(yīng)在臨床研究報告中對選用的測序方法做詳細(xì)介紹，并提供以下關(guān)于測序試驗(yàn)的詳細(xì)信息及資料。

1)測序方法原理、測序儀型號、測序試劑及消耗品的相關(guān)信息。

2)測序方法所用引物相關(guān)信息，如基因區(qū)段選擇，分子量、純度、功能性試驗(yàn)等資料。

3)對所選測序方法的分析性能進(jìn)行合理驗(yàn)證，尤其是最低檢測限的確認(rèn)，建議將所選測序方法與擬申報產(chǎn)品的相關(guān)性能進(jìn)行適當(dāng)比對分析。

4)測序方法應(yīng)建立合理的陽性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品對臨床樣本的檢測結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制。

5)提交有代表性的樣本測序圖譜及結(jié)果分析資料。

1.3臨床試驗(yàn)受試人群的選擇及樣本采集

病例選擇及樣本類型：受試者應(yīng)包含各種臨床表現(xiàn)的人群，如：宮頸細(xì)胞學(xué)檢查正常者、宮頸上皮細(xì)胞異常者以及診斷為宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）和宮頸浸潤癌等的患者，受試者年齡應(yīng)在產(chǎn)品適用人群的各年齡段（如：<30，30～39、40歲以上等）均有分布。

臨床試驗(yàn)如因試驗(yàn)體外診斷試劑與對比試劑/方法由于樣本采集、處理、保存等存在差異，不能使用同一份樣本進(jìn)行檢測，可針對每位受試者進(jìn)行兩次樣本采集，并分別進(jìn)行試驗(yàn)體外診斷試劑和對比試劑/方法的檢測，兩次采集樣本的順序應(yīng)遵循隨機(jī)原則。需要注意的是，臨床試驗(yàn)應(yīng)保證一次樣本采集不會影響下一次樣本采集。

1.4臨床試驗(yàn)樣本量

建議以與對比方法的比較研究為基礎(chǔ)進(jìn)行樣本量估算。臨床試驗(yàn)陽性樣本和陰性樣本數(shù)量應(yīng)分別滿足統(tǒng)計學(xué)要求。針對試驗(yàn)體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品或Sanger測序法進(jìn)行對比的試驗(yàn)，可采用單組目標(biāo)值法公式分別估算整體最低陽性和陰性樣本例數(shù)。

樣本量估算公式如下，

公式中，n為樣本量；Z1-α/2、Z1-β為顯著性水平和把握度的標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布的分?jǐn)?shù)位，P0為評價指標(biāo)的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)，PT為申報產(chǎn)品評價指標(biāo)預(yù)期值。

其中陽性符合率和陰性符合率的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)（P0）建議不低于90%。臨床試驗(yàn)結(jié)果中，相關(guān)評價指標(biāo)的95%置信區(qū)間下限應(yīng)不低于預(yù)設(shè)的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)。當(dāng)評價指標(biāo)P接近100%時，上述樣本量估算方法可能不適用，應(yīng)考慮選擇更加合理的方法進(jìn)行樣本量估算和統(tǒng)計學(xué)分析，如精確概率法等。申請人亦可以選擇其他樣本量估算模型，但應(yīng)詳述該樣本量估算模型及相關(guān)參數(shù)設(shè)置的科學(xué)性、合理性。

臨床試驗(yàn)中，針對產(chǎn)品檢測范圍內(nèi)的每種HPV基因型均應(yīng)具有一定的陽性例數(shù)。結(jié)合產(chǎn)品臨床性能評價需要及HPV感染陽性率，建議16型陽性不低于100例，18型陽性不低于50例，其他各型別，如能夠分型，建議各型別分別不低于30例；如不能分型，產(chǎn)品能夠涵蓋的各亞型建議分別不低于20例。針對臨床試驗(yàn)過程中確實(shí)難以收集的亞型，在提供相關(guān)證據(jù)的前提下，病例數(shù)可酌情減少。

鑒于此類產(chǎn)品樣本采集過程對檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性至關(guān)重要，因此，如產(chǎn)品采用不止一種樣本保存液，則應(yīng)針對不同的樣本保存液進(jìn)行同源樣本的比較研究試驗(yàn)，證明不同的樣本保存液不會影響檢測結(jié)果。相關(guān)比較研究試驗(yàn)應(yīng)在2家以上（含2家）臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)進(jìn)行，樣本例數(shù)不少于100例，陽性樣本應(yīng)有一定例數(shù)。

1.5統(tǒng)計學(xué)分析

應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計學(xué)方法對比較研究試驗(yàn)的檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行合理分析。對于此類試劑的比較研究試驗(yàn)，常選擇交叉四格表的形式總結(jié)兩種方法定性檢測結(jié)果，計算陽性符合率、陰性符合率和總符合率，并計算95%置信區(qū)間，以考察兩種方法檢測結(jié)果的一致性。

對于基因分型試劑，臨床試驗(yàn)中應(yīng)分別驗(yàn)證該產(chǎn)品對可鑒別HPV基因型的臨床檢測準(zhǔn)確性，針對不同基因型HPV分別完成如上所述的統(tǒng)計學(xué)分析。

結(jié)果差異樣本的分析和驗(yàn)證：對于兩種方法檢測結(jié)果不一致的樣本，申請人應(yīng)針對具體情況進(jìn)行合理分析，必要時選擇其他合理的方法進(jìn)行驗(yàn)證，亦可結(jié)合患者的臨床病情進(jìn)行分析。

2.預(yù)期用途的臨床有效性研究設(shè)計

2.1針對ASC-US人群分流用途

2.1.1臨床試驗(yàn)方法

申請人應(yīng)在適合進(jìn)行宮頸細(xì)胞學(xué)檢查的女性中，入組宮頸細(xì)胞學(xué)檢查為ASC-US的受試者，針對入組的ASC-US人群首先采用擬申報產(chǎn)品進(jìn)行HPV核酸檢測，然后，無論HPV檢測結(jié)果如何，均應(yīng)進(jìn)行陰道鏡檢查，根據(jù)陰道鏡檢查結(jié)果，必要時取樣進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。建議采用同一份宮頸脫落上皮細(xì)胞樣本，或同一時間采集的樣本，進(jìn)行細(xì)胞學(xué)檢查和HPV檢測，以避免樣本取材不同帶來的偏差；而宮頸細(xì)胞樣本采集與陰道鏡檢查之間的時間間隔不應(yīng)過長，建議不超過12周。以陰道鏡檢查和組織病理學(xué)檢查結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，評價擬申報產(chǎn)品的臨床性能。應(yīng)注意，如產(chǎn)品聲稱除16、18型以外其他基因型可以分型，應(yīng)提供關(guān)于其他基因分型具有臨床意義的支持性資料，針對其他可鑒別的型別應(yīng)保證該型別單獨(dú)陽性病例中有≥CIN2病例檢出。

2.1.2臨床試驗(yàn)受試人群

臨床試驗(yàn)應(yīng)前瞻性入組宮頸細(xì)胞學(xué)檢查為ASC-US的受試者。應(yīng)避免選取已確定需進(jìn)行陰道鏡檢查的人群，以免造成入組人群的傾向性，因此臨床試驗(yàn)應(yīng)以來自細(xì)胞學(xué)篩查的人群為主。入組人群應(yīng)盡量在不同的年齡范圍均有分布（<30、30～39和40歲以上）。

2.1.3臨床試驗(yàn)病例數(shù)

應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)體外診斷試劑靈敏度要求、疾病患病率等對入組樣本例數(shù)進(jìn)行科學(xué)的分析和計算，本臨床研究建議以臨床靈敏度為主要評價指標(biāo)，采用抽樣精度的模型進(jìn)行樣本量估算。臨床試驗(yàn)終點(diǎn)為病理學(xué)檢查結(jié)果≥CIN2。可采用如下公式：

公式中n為陽性病例數(shù)量，Z1-α/2為置信度標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布的分位數(shù)，P為評價指標(biāo)預(yù)期值，一般不大于95%，臨床試驗(yàn)總樣本量結(jié)合患病率估算。應(yīng)注意，P和Δ的取值應(yīng)有充分依據(jù)。

2.1.4 統(tǒng)計分析

臨床試驗(yàn)結(jié)果一般以四格表的形式進(jìn)行總結(jié)，并據(jù)此計算臨床靈敏度、臨床特異性、陽性預(yù)期值、陰性預(yù)期值、陽性似然比、陰性似然比，并采用適當(dāng)?shù)姆椒ㄓ嬎?5%置信區(qū)間；數(shù)據(jù)統(tǒng)計和分析方法參見表2和表3。

臨床試驗(yàn)結(jié)果：通過靈敏度、特異度、陽性似然比和陰性似然比的結(jié)果判斷試驗(yàn)體外診斷試劑用于ASC-US人群分流的臨床性能是否能夠滿足臨床要求。

針對≥CIN2水平的臨床性能評價：

臨床靈敏度= (A4+A5)/(A4+B4+A5+B5)×100%

臨床特異性= (B1+B2+B3)/(A1+B1+A2+B2+A3+B3)×100%

陽性預(yù)期值（PPV）=(A4+A5)/(A1+A2+A3+A4+A5)×100%

陰性預(yù)期值（NPV）=(B1+B2+B3)/(B1+B2+B3+B4+B5)×100%

陽性似然比=臨床靈敏度/（1-臨床特異性）

陰性似然比=（1-臨床靈敏度）/臨床特異性

針對≥CIN3水平的臨床性能評價：

臨床靈敏度= A5/(A5+B5)×100%;

臨床特異性= (B1+B2+B3+B4)/(A1+B1+A2+B2+A3+B3+A4+B4)×100%

陽性預(yù)期值（PPV）=A5/(A1+A2+A3+A4+A5)×100%

陰性預(yù)期值（NPV）=(B1+B2+B3+B4)/(B1+B2+B3+B4+B5)×100%

陽性似然比=臨床靈敏度/（1-臨床特異性）

陰性似然比=（1-臨床靈敏度）/臨床特異性

2.2針對宮頸癌聯(lián)合篩查用途

2.2.1臨床試驗(yàn)方法

該部分臨床試驗(yàn)包括基礎(chǔ)檢測和受試者隨訪兩部分，以下針對兩部分內(nèi)容分別介紹。

基礎(chǔ)檢測：入組人群應(yīng)分別接受擬申報產(chǎn)品的HPV檢測，記為基礎(chǔ)檢測數(shù)據(jù)，其中，若擬申報產(chǎn)品可進(jìn)行16、18型HPV分型檢測，則16、18型陽性的受試者應(yīng)立即進(jìn)行陰道鏡檢查，必要時結(jié)合組織病理學(xué)檢查，結(jié)果為≥CIN2的受試者判為“陽性”，不再進(jìn)行下述隨訪，其他受試者進(jìn)入隨訪程序。

受試者隨訪：隨訪時間建議至少持續(xù)三年。基礎(chǔ)檢測結(jié)果HPV陽性的受試者每年接受隨訪，HPV陰性的受試者每三年接受一次隨訪，以及在隨訪終點(diǎn)接受隨訪。隨訪中應(yīng)對受試者進(jìn)行宮頸細(xì)胞學(xué)檢查，其中檢查結(jié)果為正常者繼續(xù)隨訪，結(jié)果為≥ASC-US的受試者則應(yīng)進(jìn)行陰道鏡檢查，必要時結(jié)合組織病理學(xué)檢查，結(jié)果為≥CIN2的受試者判為“陽性”，并終止隨訪，其他均應(yīng)持續(xù)至隨訪終點(diǎn)，最終未發(fā)展為≥CIN2的受試者判為“陰性”。

2.2.2臨床試驗(yàn)受試人群

臨床試驗(yàn)應(yīng)設(shè)置科學(xué)合理的病例入排標(biāo)準(zhǔn)，入組的受試人群應(yīng)為未見上皮內(nèi)病變或惡性細(xì)胞（NILM）的30歲以上女性。病例入組應(yīng)為前瞻性入組。

2.2.3臨床試驗(yàn)樣本量

此項(xiàng)臨床試驗(yàn)的入組人群應(yīng)盡量在不同的年齡范圍均有分布（30～39和40歲以上）。應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)體外診斷試劑靈敏度要求、疾病患病率等對入組樣本例數(shù)進(jìn)行科學(xué)的分析和計算，并根據(jù)臨床實(shí)際情況對病例脫落比例設(shè)定合理要求，隨訪終點(diǎn)為病理學(xué)檢查結(jié)果≥CIN2。臨床試驗(yàn)可選擇抽樣精度模型進(jìn)行樣本量估算，公式如下。

公式中n為陽性病例數(shù)量，Z1-α/2為置信度標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布的分位數(shù)，P為評價指標(biāo)預(yù)期值，Δ為P的允許誤差大小。臨床試驗(yàn)結(jié)合患病率進(jìn)行總樣本量估算。

應(yīng)注意，P和Δ的取值應(yīng)有充分依據(jù)。

2.2.4統(tǒng)計學(xué)分析

針對HPV基礎(chǔ)檢測結(jié)果為陰性和陽性的受試者分別評價其發(fā)展為≥CIN2的絕對風(fēng)險值和發(fā)展為≥CIN3的絕對風(fēng)險值，計算HPV陽性組相對于陰性組發(fā)展為≥CIN2和≥CIN3的相對風(fēng)險值及95%置信區(qū)間，確認(rèn)產(chǎn)品性能滿足臨床要求。此外，HPV陰性人群的絕對風(fēng)險值應(yīng)足夠低，以證明該方法對陰性人群的保護(hù)作用。最后，應(yīng)給出受試人群總體的≥CIN2絕對風(fēng)險值和≥CIN3絕對風(fēng)險值。風(fēng)險值的計算可參考如下方法（表4和表5）：

臨床試驗(yàn)過程中應(yīng)注意，如產(chǎn)品聲稱除16、18型以外其他基因型可以分型，針對其他可鑒別的型別應(yīng)保證該型別單獨(dú)陽性病例中有≥CIN2病例篩出。

產(chǎn)品靈敏度會影響接受HPV核酸檢測人群轉(zhuǎn)診陰道鏡的比例，過高的靈敏度可能使更多的CIN2以下的病例接受陰道鏡，影響產(chǎn)品特異性，如產(chǎn)品靈敏度高于已上市同類產(chǎn)品，需要進(jìn)行轉(zhuǎn)診陰道鏡檢測結(jié)果＜CIN2人數(shù)/轉(zhuǎn)診陰道鏡檢測結(jié)果≥CIN2人數(shù)的分析，結(jié)果應(yīng)符合臨床要求。

2.3針對宮頸癌初篩用途

2.3.1臨床試驗(yàn)方法

該部分臨床試驗(yàn)包括基礎(chǔ)檢測和受試者隨訪兩部分，以下針對兩部分內(nèi)容分別介紹。

基礎(chǔ)檢查：所有受試者分別進(jìn)行HPV檢測和細(xì)胞學(xué)檢查，作為基礎(chǔ)檢查數(shù)據(jù)；其中，檢測結(jié)果為16/18型陽性的受試者、HPV陽性同時細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果為ASC-US的受試者、細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果＞ASC-US的受試者應(yīng)立即進(jìn)行陰道鏡檢查，必要時結(jié)合組織病理學(xué)檢查，結(jié)果為≥CIN2的受試者判為“陽性”，不再進(jìn)行下述隨訪，其他受試者進(jìn)入隨訪程序。

受試者隨訪：隨訪時間至少持續(xù)三年。基礎(chǔ)檢查結(jié)果除16、18型外其余HPV陽性或細(xì)胞學(xué)檢查ASC-US的受試者每年接受隨訪，HPV陰性且細(xì)胞學(xué)檢查為正常的受試者每三年接受一次隨訪，以及在隨訪終點(diǎn)接受隨訪。隨訪方法與上述第2.2.1條所述一致，至少隨訪三年或組織病理學(xué)檢查結(jié)果為≥CIN2。

2.3.2臨床試驗(yàn)受試者選擇

申請人應(yīng)按照此項(xiàng)預(yù)期用途所述，隨機(jī)選取需接受常規(guī)宮頸癌篩查且宮頸細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果未知的女性作為受試者。病例入組應(yīng)為前瞻性入組。

2.3.3臨床試驗(yàn)樣本量

可參考2.2.3。

2.3.4統(tǒng)計學(xué)分析

可參照上述第2.2.4條所述方法，HPV+組相對于HPV-組應(yīng)呈現(xiàn)具有顯著性差異的高風(fēng)險值，NILM組相對于HPV-組應(yīng)呈現(xiàn)具有顯著差性異的高風(fēng)險值。此外，HPV陰性人群的絕對風(fēng)險值應(yīng)足夠低；同時計算受試人群總體的≥CIN2絕對風(fēng)險值和≥CIN3絕對風(fēng)險值。

此項(xiàng)臨床試驗(yàn)的入組人群同樣應(yīng)在適用的年齡范圍內(nèi)不同的年齡段均有分布（<30、30～39和40歲以上），且各年齡段人群均具有一定數(shù)量，特別是當(dāng)該預(yù)期用途適用于30歲以下人群時，該年齡段應(yīng)有一定的陽性樣本量，并針對該年齡段單獨(dú)進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，以驗(yàn)證該試劑的初篩性能。除16、18型外可鑒別型別的要求可參考上述第2.2.4條。

綜上，申請人應(yīng)分別從HPV核酸檢測準(zhǔn)確性和臨床意義兩方面評價產(chǎn)品的臨床性能。若臨床試驗(yàn)未得到有顯著統(tǒng)計學(xué)意義的結(jié)果，申請人應(yīng)考慮陽性判斷值設(shè)置是否科學(xué)，受試者入組標(biāo)準(zhǔn)是否存在偏差，受試者例數(shù)是否足夠，病例脫落比例是否可以接受，或者隨訪年限是否需要延長等因素。同時，值得注意的是，臨床試驗(yàn)的結(jié)果需綜合評價，除了靈敏度、特異性、預(yù)期值、似然比、風(fēng)險值的評價以外，HPV陽性率及CIN檢出率等的統(tǒng)計同樣重要，應(yīng)符合客觀規(guī)律。

3.臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的選擇

應(yīng)選擇不少于3家（含3家）具備相應(yīng)條件且按照規(guī)定備案的醫(yī)療器械臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)開展臨床試驗(yàn)。其選擇應(yīng)盡量考慮擬申報產(chǎn)品的特點(diǎn)和預(yù)期用途，綜合流行病學(xué)背景，使臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)和受試者的選擇具有一定的地域代表性。且臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)具有分子生物學(xué)方法檢測的優(yōu)勢，試驗(yàn)操作人員應(yīng)有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)，熟悉評價方案。

為了保證入組受試者代表性和臨床試驗(yàn)可操作性，可委托社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)機(jī)構(gòu)、鄉(xiāng)（鎮(zhèn)）衛(wèi)生院、基層疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)等進(jìn)行受試者招募，注意應(yīng)由臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)進(jìn)行委托，臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)對臨床試驗(yàn)整體質(zhì)量控制、臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)的真實(shí)性與合規(guī)性負(fù)責(zé)；臨床試驗(yàn)中的檢測分析（包括試驗(yàn)體外診斷試劑檢測、對比方法或臨床參考標(biāo)準(zhǔn)涉及的檢測等）、數(shù)據(jù)管理及統(tǒng)計分析應(yīng)由臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)完成；受試者招募、知情同意書簽署、樣本采集等基礎(chǔ)操作過程可由社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)機(jī)構(gòu)等完成；有關(guān)任務(wù)分工等應(yīng)在臨床試驗(yàn)方案中明確，由審查該臨床試驗(yàn)的倫理委員會審查批準(zhǔn)；臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)建立相關(guān)管理制度，明確各方職責(zé)，加強(qiáng)培訓(xùn)和管理，確保臨床試驗(yàn)結(jié)果真實(shí)、準(zhǔn)確、完整和可追溯。

4.倫理學(xué)要求

臨床試驗(yàn)必須符合赫爾辛基宣言的倫理學(xué)準(zhǔn)則，必須獲得臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)倫理委員會的同意。研究者應(yīng)考慮臨床試驗(yàn)用樣本的獲得和試驗(yàn)結(jié)果對受試者的風(fēng)險性，應(yīng)提交倫理委員會的審查意見及受試者的知情同意書。

5.臨床試驗(yàn)質(zhì)量控制

開展臨床試驗(yàn)前，申請人應(yīng)與各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)協(xié)商制定統(tǒng)一的、科學(xué)合理的臨床試驗(yàn)方案，按照臨床試驗(yàn)方案組織制定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，并進(jìn)行驗(yàn)證，以確保臨床試驗(yàn)操作在各個臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)之間的一致性。在整個臨床試驗(yàn)過程中均應(yīng)遵循預(yù)定的方案，不可隨意改動。臨床試驗(yàn)應(yīng)在臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行，并由本實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作，申報單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉試驗(yàn)進(jìn)程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。

試驗(yàn)方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被剔除均應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗(yàn)操作過程中和判定試驗(yàn)結(jié)果時應(yīng)采用盲法以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性，并在臨床試驗(yàn)方案中詳細(xì)說明樣本編盲和揭盲的操作流程。

關(guān)于臨床檢測性能研究的比較研究試驗(yàn)，各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)選用的對比方法應(yīng)一致，以便進(jìn)行合理的統(tǒng)計學(xué)分析；在預(yù)期用途的臨床有效性研究中涉及宮頸細(xì)胞學(xué)檢查、陰道鏡檢查及組織病理學(xué)檢查，應(yīng)采用統(tǒng)一判讀標(biāo)準(zhǔn)，保持各臨床研究機(jī)構(gòu)間判讀的一致性；受試者隨訪中樣本脫落的判定標(biāo)準(zhǔn)以及試驗(yàn)數(shù)據(jù)分析和統(tǒng)計方法等亦應(yīng)在各臨床研究機(jī)構(gòu)間保持一致。以上內(nèi)容均應(yīng)在臨床試驗(yàn)方案中有明確、清晰的表述。

臨床試驗(yàn)開始前，應(yīng)進(jìn)行臨床試驗(yàn)的預(yù)試驗(yàn)，以熟悉并掌握相關(guān)試驗(yàn)方法的操作、儀器、技術(shù)性能等，最大限度控制試驗(yàn)誤差。整個試驗(yàn)過程均應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。

6.臨床證據(jù)的形式要求

申請人應(yīng)按照《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》《醫(yī)療器械臨床試驗(yàn)質(zhì)量管理規(guī)范》等法規(guī)文件要求提交各機(jī)構(gòu)倫理審查意見、臨床試驗(yàn)方案、臨床試驗(yàn)小結(jié)、臨床試驗(yàn)報告以及臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)庫。

（六）產(chǎn)品說明書和標(biāo)簽樣稿

產(chǎn)品說明書格式應(yīng)滿足《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求。產(chǎn)品說明書中技術(shù)內(nèi)容應(yīng)與注冊申報資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，應(yīng)以規(guī)范格式進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。高危型HPV核酸檢測及基因分型試劑說明書編寫應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注以下內(nèi)容。

1.【預(yù)期用途】

高危型HPV核酸檢測及基因分型試劑的臨床意義主要在于對婦女罹患宮頸疾病的風(fēng)險程度提供信息，以便于臨床醫(yī)生結(jié)合病人的其他檢查結(jié)果進(jìn)行更加準(zhǔn)確的疾病判斷和科學(xué)的患者管理。

申請人應(yīng)根據(jù)相關(guān)臨床研究結(jié)果確定產(chǎn)品的預(yù)期用途。一般的，此類產(chǎn)品預(yù)期用途描述包含以下幾方面：

（1）該產(chǎn)品用于體外定性檢測女性宮頸脫落上皮細(xì)胞中高危型人乳頭瘤病毒（HPV）（列出具體能夠檢測的基因型）核酸（明確檢測靶物質(zhì)，如DNA、RNA）。明確該產(chǎn)品是否能夠鑒別HPV基因型。

（2）該類產(chǎn)品主要用于：

①篩查宮頸細(xì)胞學(xué)檢查為ASC-US（意義未確定的非典型鱗狀上皮細(xì)胞）結(jié)果的患者，以確定是否需要進(jìn)行陰道鏡檢查；

②對于30歲及以上的女性，通過檢測是否有高危型HPV感染，與宮頸細(xì)胞學(xué)檢查聯(lián)合進(jìn)行宮頸癌篩查，此檢測結(jié)合細(xì)胞學(xué)病史和其他風(fēng)險因素的評估、以及臨床診療和篩查指南的要求，用于指導(dǎo)患者的管理；

③對于某年齡段（根據(jù)臨床試驗(yàn)結(jié)果而定）女性，通過檢測是否有高危型HPV感染，進(jìn)行宮頸癌篩查，此檢測結(jié)合細(xì)胞學(xué)病史和其他風(fēng)險因素的評估、以及臨床診療和篩查指南的要求，用于指導(dǎo)患者的管理。

未做相關(guān)臨床試驗(yàn)的產(chǎn)品應(yīng)在此項(xiàng)下聲明：由于未做相關(guān)驗(yàn)證，本產(chǎn)品不能用于相關(guān)臨床預(yù)期用途（按照如上項(xiàng)目描述）。

（3）申請人應(yīng)在此項(xiàng)下強(qiáng)調(diào)：

①如申報產(chǎn)品不包含上述第（2）③條所述的預(yù)期用途，則申請人應(yīng)聲明：此檢測不能獨(dú)立或優(yōu)先于宮頸細(xì)胞學(xué)檢查應(yīng)用，不推薦在任何年齡段的人群中單獨(dú)使用本檢測進(jìn)行宮頸癌篩查；此方法不能代替宮頸細(xì)胞學(xué)檢查。

②年齡＜30歲的女性中，HPV感染率很高，同時自主清除率也很高，因此對這部分人群，如宮頸細(xì)胞學(xué)檢查正常則不應(yīng)再采用高危型HPV檢測進(jìn)行聯(lián)合篩查，建議僅采用宮頸細(xì)胞學(xué)方法進(jìn)行篩查，或參照上述第（2）③條所述進(jìn)行篩查。

③本試劑檢測結(jié)果應(yīng)結(jié)合宮頸細(xì)胞學(xué)檢查及其他相關(guān)醫(yī)學(xué)檢查結(jié)果進(jìn)行綜合分析，不得單獨(dú)作為患者管理的依據(jù)。

④高危型HPV核酸檢測試劑的應(yīng)用應(yīng)符合相關(guān)臨床診療和篩查指南的要求。

（4）此外申請人還應(yīng)就以下內(nèi)容進(jìn)行簡要介紹：

①臨床背景的介紹，包括病原體生物學(xué)特征，基因型劃分，感染后的臨床癥狀及該檢測的臨床意義等。著重說明高危型HPV感染與宮頸癌的相關(guān)性，描述應(yīng)客觀、科學(xué)、全面。

②說明申報產(chǎn)品選擇高危型HPV基因型的依據(jù)和考慮。原則上建議選擇至少包含16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68基因型在內(nèi)的多基因型聯(lián)合檢測的設(shè)計方式，以保證該產(chǎn)品用于宮頸癌篩查及風(fēng)險評估的能力，亦可同時包含26、53、66、73、82型中的一個或數(shù)個型別。不應(yīng)包含其他低危型HPV。

2.【檢驗(yàn)原理】

詳細(xì)說明試劑盒技術(shù)原理，及核酸分離/純化方法、原理。說明檢測的靶基因座位；介紹引物及探針設(shè)計、不同靶核酸反應(yīng)體系（管）組合、質(zhì)控品（對照品）設(shè)置及熒光信號標(biāo)記等。如添加了相關(guān)的防污染組分，也應(yīng)對其作用機(jī)理作適當(dāng)介紹。

3.【主要組成成分】

明確試劑盒中各組分及主要成分。明確需要但未提供的材料，例如核酸提取試劑等的產(chǎn)品名稱，生產(chǎn)廠家，貨號及注冊證號、備案號等信息。

4.【儲存條件及有效期】

試劑盒的效期穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性、凍融次數(shù)要求等。應(yīng)與相應(yīng)的穩(wěn)定性研究結(jié)論一致。

5.【適用儀器】

所有適用的儀器型號，提供與儀器有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)用戶操作。

6.【樣本要求】 

明確適用的樣本類型。詳細(xì)描述樣本采集及預(yù)處理要求、運(yùn)輸要求、保存條件及時間等。樣本采集所需設(shè)備及保存液，需明確供應(yīng)商、貨號及注冊證號（如有）。

若有通用的樣本的采集及處理方式的技術(shù)規(guī)范或指南，應(yīng)遵循并引用。

7.【檢驗(yàn)方法】

詳細(xì)說明試驗(yàn)操作的各個步驟，包括：

7.1試劑配制方法、注意事項(xiàng)。

7.2核酸分離/純化的條件、步驟及注意事項(xiàng)，質(zhì)控品（對照品）參與樣本核酸的平行提取等。

7.3擴(kuò)增反應(yīng)前準(zhǔn)備：各組分加樣體積及順序等。

7.4逆轉(zhuǎn)錄過程（如涉及）的溫度和時間、PCR各階段的溫度和時間、循環(huán)數(shù)等。

7.5儀器設(shè)置：各適用機(jī)型的反應(yīng)參數(shù)設(shè)置等。

7.6質(zhì)量控制：明確質(zhì)控品和內(nèi)標(biāo)的檢測結(jié)果范圍，作為實(shí)驗(yàn)有效性的標(biāo)準(zhǔn)。
    8.【陽性判斷值】

總結(jié)陽性判斷值研究方法及結(jié)論。

9.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

結(jié)合質(zhì)控品（對照品）以及樣本管中靶基因和內(nèi)標(biāo)的檢測結(jié)果，列明結(jié)果陰性、陽性、復(fù)測、無效等所有情形。

如有適用的臨床診療或篩查指南，則應(yīng)在此項(xiàng)下引用，相應(yīng)檢驗(yàn)結(jié)果的解釋應(yīng)符合相關(guān)指南的要求。

10.【檢驗(yàn)方法的局限性】

10.1本試劑檢測結(jié)果應(yīng)結(jié)合宮頸細(xì)胞學(xué)檢查及其他相關(guān)醫(yī)學(xué)檢查結(jié)果進(jìn)行綜合分析，不得單獨(dú)作為患者管理的依據(jù)。

10.2 不合理的樣本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)及處理、以及不當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)操作和實(shí)驗(yàn)環(huán)境均有可能導(dǎo)致假陰性或假陽性結(jié)果。

11.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】詳述以下性能指標(biāo)：

11.1國家參考品（如有）和企業(yè)參考品的符合情況。

11.2檢出限：說明每種HPV基因型的檢出限，簡要介紹評價方法、所用樣本情況。

11.3精密度：詳細(xì)描述針對各種HPV基因型，采用不同來源的樣本（如人工模擬樣本和臨床樣本）在各個濃度水平進(jìn)行的精密度評價結(jié)果，可采用列表形式描述。

11.4分析特異性：

交叉反應(yīng)：說明經(jīng)過交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體名稱、交叉反應(yīng)性及其驗(yàn)證濃度水平。

干擾試驗(yàn)：說明潛在干擾物質(zhì)的評價濃度水平及干擾情況，病原體干擾及競爭性干擾情況。

11.5臨床試驗(yàn)：簡要介紹試驗(yàn)方法、受試者及樣本、試驗(yàn)結(jié)果和結(jié)論等。

12.【注意事項(xiàng)】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

12.1如該產(chǎn)品含有人源或動物源性物質(zhì)，應(yīng)給出生物安全性的警告。

12.2臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)嚴(yán)格按照《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室管理辦法》等有關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室、臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的管理規(guī)范執(zhí)行。

12.3強(qiáng)調(diào)產(chǎn)品性能僅針對聲稱的適用樣本類型及【樣本要求】項(xiàng)下說明的樣本采集和處理方法（包括樣本采集液等）進(jìn)行了驗(yàn)證，其他樣本類型或樣本采集、處理方法不能保證產(chǎn)品性能。

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附表1