附件：人Septin 9基因甲基化檢測試劑非臨床研究審評要點(diǎn)（2025年第15號）.doc

人Septin 9基因甲基化檢測試劑
非臨床研究審評要點(diǎn)

本審評要點(diǎn)主要針對人Septin 9基因甲基化檢測試劑的分析性能、陽性判斷值、穩(wěn)定性、主要原材料及生產(chǎn)工藝等研究過程，為體外診斷試劑注冊申請人和技術(shù)審評部門提供參考。

本審評要點(diǎn)是對人Septin 9基因甲基化檢測試劑的一般要求，注冊申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本審評要點(diǎn)是供注冊申請人和技術(shù)審評人員使用的指導(dǎo)性文件，但不包括審評審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本審評要點(diǎn)。如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。

本審評要點(diǎn)是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

本審評要點(diǎn)適用于采用實(shí)時(shí)熒光PCR法，對人外周血血漿中Septin 9基因的甲基化進(jìn)行體外定性檢測的試劑。可用于臨床結(jié)直腸癌疑似患者的輔助診斷。

Septin系列基因是一類具有三磷酸鳥苷活性的保守基因家族，參與多種生物過程。Septin 9是Septin家族的一員，廣泛存在于人類細(xì)胞中，位于17q25.3，含有17個(gè)外顯子，存在多個(gè)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。甲基化的Septin 9基因是結(jié)直腸癌早期發(fā)生、發(fā)展過程中的分子標(biāo)志物之一。

對于Septin 9基因甲基化與其他標(biāo)志物聯(lián)合檢測的試劑，應(yīng)結(jié)合適用的預(yù)期人群、樣本類型、臨床適應(yīng)癥等，針對聯(lián)合檢測的非臨床性能進(jìn)行充分研究。

對基于其他樣本類型、方法學(xué)或檢測靶標(biāo)的試劑，可能部分要求不完全適用或本文所述內(nèi)容不夠全面，注冊申請人可以參照本審評要點(diǎn)，根據(jù)產(chǎn)品特性對適用部分進(jìn)行評價(jià)或補(bǔ)充其他的評價(jià)資料進(jìn)行相應(yīng)驗(yàn)證。

本審評要點(diǎn)適用于進(jìn)行產(chǎn)品注冊和變更注冊申報(bào)的產(chǎn)品。

二、注冊審查要點(diǎn)

（一）監(jiān)管信息

1.產(chǎn)品名稱及分類編碼

產(chǎn)品名稱應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》及相關(guān)法規(guī)的要求，如Septin 9基因甲基化檢測試劑盒（PCR熒光探針法）。按照《體外診斷試劑分類規(guī)則》，該產(chǎn)品按照第三類體外診斷試劑管理，分類編碼為6840。

2.注冊申請人還需提交產(chǎn)品列表、關(guān)聯(lián)文件、申報(bào)前與監(jiān)管機(jī)構(gòu)的聯(lián)系情況和溝通記錄及符合性聲明等文件。

（二）綜述資料

內(nèi)容應(yīng)符合《醫(yī)療器械監(jiān)督管理?xiàng)l例》和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》的相關(guān)要求，主要包括概述、產(chǎn)品描述、預(yù)期用途、申報(bào)產(chǎn)品上市歷史及其他需說明的內(nèi)容。建議申請人著重介紹以下幾方面內(nèi)容：

1.產(chǎn)品描述中應(yīng)詳述檢測原理、血漿游離DNA 提取方法原理、甲基化檢測原理、DNA轉(zhuǎn)化原理、PCR檢測原理，此外描述引物探針設(shè)計(jì)原則及其與檢測位點(diǎn)的對應(yīng)關(guān)系，檢測基因及甲基化位點(diǎn)信息、篩選過程、選擇依據(jù)以及結(jié)果判斷方法等，提交文獻(xiàn)依據(jù)。介紹靶基因及其其甲基化的生物學(xué)特征及臨床意義，提交文獻(xiàn)依據(jù)。明確內(nèi)標(biāo)與質(zhì)控的設(shè)置和選擇依據(jù)，如有防污染措施，需描述防污染的原理。

2.與同類和/或前代產(chǎn)品的比較，應(yīng)著重從方法學(xué)、檢驗(yàn)原理、樣本類型、檢測的基因名稱、引物覆蓋的檢測區(qū)段、探針覆蓋的甲基化位點(diǎn)、組成成分、內(nèi)標(biāo)、質(zhì)控物、判讀規(guī)則、分析性能、臨床性能以及臨床用途、適用人群等方面詳細(xì)說明申報(bào)產(chǎn)品與目前市場上已獲批同類產(chǎn)品之間的異同，如需聯(lián)合其他基因甲基化實(shí)現(xiàn)預(yù)期用途，同時(shí)需比較聯(lián)合檢測的靶標(biāo)單獨(dú)和組合信息，并明確申報(bào)產(chǎn)品組合特征與患者受益情況。

3.預(yù)期用途需明確適用人群、樣本類型、基因名稱、檢測的甲基化位點(diǎn)、基因區(qū)段及臨床用途。需提交臨床適應(yīng)癥的發(fā)病原因、臨床癥狀、流行病學(xué)特征、該疾病相關(guān)篩查、診斷及有效治療方法，明確現(xiàn)有方法臨床應(yīng)用的優(yōu)缺點(diǎn)。詳述檢測靶點(diǎn)與預(yù)期用途之間的關(guān)系，提供相關(guān)指南或權(quán)威文獻(xiàn)。描述Septin 9基因在腫瘤不同分期組織中的甲基化狀態(tài)以及在其他腫瘤及非腫瘤組織中的甲基化狀態(tài)，提供參考文獻(xiàn)。

4. Septin 9基因的甲基化檢測如需結(jié)合其他檢測試劑共同實(shí)現(xiàn)預(yù)期用途，需提交聯(lián)合使用的檢測試劑盒的上市信息，并提供具體的被測基因、位點(diǎn)、檢驗(yàn)原理、檢測方法、陽性判斷值及結(jié)果判讀方法等信息。整個(gè)檢測系統(tǒng)應(yīng)已定型。

（三）非臨床資料

1.產(chǎn)品技術(shù)要求及檢驗(yàn)報(bào)告

1.1 產(chǎn)品技術(shù)要求

申請人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)產(chǎn)品研制、前期評價(jià)等結(jié)果，依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻(xiàn)資料，結(jié)合產(chǎn)品特性按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（2022年第8號）的要求編寫產(chǎn)品技術(shù)要求。該類產(chǎn)品作為第三類體外診斷試劑，應(yīng)將主要原材料及生產(chǎn)工藝要求等內(nèi)容作為附錄附于產(chǎn)品技術(shù)要求正文后。

如有適用的國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，產(chǎn)品技術(shù)要求的相關(guān)要求應(yīng)不低于相應(yīng)的要求。

1.2產(chǎn)品檢驗(yàn)報(bào)告

根據(jù)《體外診斷試劑注冊申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》的要求，申請人應(yīng)當(dāng)提供三個(gè)不同生產(chǎn)批次產(chǎn)品的檢驗(yàn)報(bào)告，有適用的國家標(biāo)準(zhǔn)品，應(yīng)當(dāng)使用國家標(biāo)準(zhǔn)品對產(chǎn)品進(jìn)行檢驗(yàn)。報(bào)告形式可為申請人出具的自檢報(bào)告或委托有資質(zhì)的醫(yī)療器械檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)出具的檢驗(yàn)報(bào)告。申請人開展自檢的，應(yīng)當(dāng)符合《醫(yī)療器械注冊自檢管理規(guī)定》及相關(guān)法規(guī)的要求。

2.分析性能研究

注冊申請人應(yīng)當(dāng)在原材料和生產(chǎn)工藝經(jīng)過選擇和確認(rèn)、質(zhì)量管理體系得到有效控制并且保證產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定的基礎(chǔ)上，采用完整、確定的檢測系統(tǒng)進(jìn)行分析性能評估，包括具體研究方法、質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)、試驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)分析等詳細(xì)資料。對于本類產(chǎn)品建議著重對以下分析性能進(jìn)行研究：

如試劑用于不同適用機(jī)型，需要在不同機(jī)型上分別進(jìn)行性能評估。

每項(xiàng)性能評估應(yīng)盡量采用與適用樣本類型一致的臨床樣本進(jìn)行研究。不同樣本類型應(yīng)分別進(jìn)行研究。

分析性能評估內(nèi)容包括樣本穩(wěn)定性、適用樣本類型、DNA提取/純化性能及甲基化DNA轉(zhuǎn)化性能、準(zhǔn)確度、精密度、檢出限、特異性、反應(yīng)體系等研究。

2.1樣本穩(wěn)定性

樣本穩(wěn)定性可包括樣本處理不同階段的樣本穩(wěn)定性研究，一般包括樣本各種實(shí)際運(yùn)輸及儲存（常溫、冷藏和冷凍）條件下的保存期限驗(yàn)證，以確認(rèn)樣本的保存條件及保存時(shí)間。可以在合理的溫度范圍內(nèi)，每間隔一定的時(shí)間段即對儲存樣本進(jìn)行驗(yàn)證，從而確認(rèn)不同類型樣本的穩(wěn)定性。可冷凍保存的樣本還應(yīng)對凍融次數(shù)進(jìn)行合理驗(yàn)證。應(yīng)明確具體的保存溫度范圍。

如核酸提取產(chǎn)物可保存，還需對核酸提取產(chǎn)物的保存條件和保存時(shí)間進(jìn)行研究。

如甲基化DNA轉(zhuǎn)化后的樣本可保存，需提交轉(zhuǎn)化后的樣本穩(wěn)定性研究資料。

2.2適用樣本類型

明確適用的樣本類型。如有不同樣本類型或適用于不同抗凝劑，需提交樣本類型適用的研究資料。

2.3 DNA提取/純化性能及甲基化DNA轉(zhuǎn)化性能

在進(jìn)行DNA甲基化檢測前，應(yīng)有適當(dāng)?shù)暮怂崽崛?純化步驟。應(yīng)根據(jù)樣本類型、檢測目的選擇DNA提取純化方法。無論檢測試劑是否含有核酸提取/純化組分，申請人都應(yīng)對配套使用的核酸提取/純化方法的提取效率和提取核酸純度、濃度、DNA完整性進(jìn)行評估，此外需結(jié)合試劑對檢出限、重復(fù)性、抗干擾性能等進(jìn)行充分的驗(yàn)證，并評價(jià)該方法能否滿足該類產(chǎn)品的要求。循環(huán)游離DNA（circlulating cell-free DNA，cfDNA）的提取純化和處理應(yīng)考慮避免基因組DNA的污染。不同樣本類型應(yīng)分別進(jìn)行核酸提取/純化性能的研究驗(yàn)證，根據(jù)樣本類型制定質(zhì)量合格標(biāo)準(zhǔn)并進(jìn)行評價(jià)。應(yīng)采用真實(shí)適用樣本進(jìn)行提取效率的研究。

DNA甲基化檢測需要針對不同的樣本類型與檢測應(yīng)用選擇適宜的轉(zhuǎn)化方法。對于通過重亞硫酸鹽處理DNA的情形，應(yīng)提交重亞硫酸鹽處理試劑的篩選研究、不同甲基化比例的樣本的轉(zhuǎn)化效率研究、DNA的回收效率等性能研究，設(shè)定相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

2.4準(zhǔn)確度

采用申報(bào)產(chǎn)品和對比方法對經(jīng)臨床診斷確定后的不同核酸濃度和甲基化水平臨床樣本進(jìn)行平行檢測，評估申報(bào)產(chǎn)品的準(zhǔn)確度。應(yīng)包括一定數(shù)量的陽性和陰性及干擾樣本。

2.5精密度

使用不同濃度和不同甲基化比例的臨床樣本，采用三批試劑對可能影響檢測精密度的主要變量進(jìn)行驗(yàn)證，應(yīng)考慮運(yùn)行、時(shí)間、操作者、儀器、試劑批次和地點(diǎn)等影響精密度的條件，設(shè)計(jì)合理的精密度試驗(yàn)方案進(jìn)行評價(jià)。精密度評價(jià)試驗(yàn)應(yīng)包含核酸提取/純化及甲基化DNA轉(zhuǎn)化步驟。

2.6檢出限

檢出限研究的目的是考察在一定量的適用樣本DNA濃度背景下能夠檢測的甲基化陽性樣本最低比例，該背景DNA濃度建議參考患者血漿cfDNA濃度 。

2.6.1檢出限的確定

對不同DNA濃度下含有不同比例甲基化DNA的樣本進(jìn)行檢測，確定樣本的檢出限。可使用不同濃度、不同甲基化比例的模擬樣本進(jìn)行研究，采用臨床陰性基質(zhì)進(jìn)行稀釋，每濃度梯度使用三批試劑分別在適用機(jī)型上檢測至少20次，將檢出率大于等于95%的最低濃度水平確定為檢出限。也可選用其他合理方法進(jìn)行檢出限的建立。

2.6.2檢出限的驗(yàn)證

檢測限的驗(yàn)證可使用三批試劑在適用機(jī)型上對檢出限濃度水平的臨床樣本檢測至少20次，陽性檢出率應(yīng)不低于95%。檢出限可表示為xx濃度的野生型DNA背景下*%的Septin 9甲基化DNA。

2.7 特異性

2.7.1交叉反應(yīng)

應(yīng)考慮含非目標(biāo)基因甲基化的其他甲基化基因、Septin 9基因擴(kuò)增片段SNP位點(diǎn)、非甲基化Septin 9基因等對檢測結(jié)果的影響。

特異性驗(yàn)證樣本包括可轉(zhuǎn)移到結(jié)直腸的其他原位癌種、其他常見癌種（對于結(jié)直腸癌輔助診斷預(yù)期用途，包含但不限于其他消化道癌種等）以及其他良性疾病（如息肉、痔瘡、胃腸道間質(zhì)瘤等）相關(guān)基因甲基化陽性的人血漿樣本。若有交叉反應(yīng)，應(yīng)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分析。

2.7.2 干擾試驗(yàn)

應(yīng)針對可能的內(nèi)源和外源性干擾物，采用弱陽性樣本對高濃度干擾物質(zhì)進(jìn)行干擾試驗(yàn)研究。內(nèi)源性干擾物包括脂肪酸、甘油三酯、膽固醇、血紅蛋白、血紅素、膽紅素等。藥物包括胃腸道疾病常用藥物、抗生素（如阿莫西林、甲硝唑、頭孢曲松鈉、左氧氟沙星等）、對乙酰氨基酚、質(zhì)子泵抑制劑（如奧美拉唑等）、胃粘膜保護(hù)劑（如硫糖鋁等）、胃腸道動力藥（如嗎丁啉等）、H2受體拮抗劑(如西咪替丁等）、降血脂藥（他汀類）、降血壓藥等。

對多重PCR反應(yīng)體系中的不同檢測靶標(biāo)間的相互干擾進(jìn)行研究。

2.8反應(yīng)體系

2.8.1 確定最佳反應(yīng)體系的研究資料，包括甲基化DNA轉(zhuǎn)化用核酸樣本體積，甲基化DNA轉(zhuǎn)化反應(yīng)體系及反應(yīng)條件（如涉及），反應(yīng)體系中的加樣量、試劑用量、反應(yīng)體系各成分終濃度(如酶濃度、引物/探針濃度、dNTP濃度、陽離子濃度等)。對于多重PCR反應(yīng)體系，應(yīng)針對靶標(biāo)與內(nèi)標(biāo)的擴(kuò)增效率及相互影響進(jìn)行充分研究。

2.8.2提供PCR反應(yīng)各階段溫度、時(shí)間及循環(huán)數(shù)、熒光采集時(shí)間的研究資料。

2.8.3 提供不同機(jī)型基線、閾值、閾值循環(huán)數(shù)（Ct）、熒光強(qiáng)度確定的研究資料。

2.8.4 提供質(zhì)控體系設(shè)置、Ct值確定的研究資料。

2.8.5 不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述，并提交驗(yàn)證資料。

2.8.6 如申報(bào)產(chǎn)品包含核酸分離/純化試劑，應(yīng)提交對核酸分離/純化過程進(jìn)行優(yōu)化的研究資料。研究確定最佳核酸提取反應(yīng)體系，包括核酸提取使用的樣本體積、洗脫體積、離心條件等。

3.穩(wěn)定性

申報(bào)試劑的穩(wěn)定性主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性（有效期）、使用穩(wěn)定性（如開瓶穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性（如適用）、機(jī)載穩(wěn)定性（如適用）等）、運(yùn)輸穩(wěn)定性、凍融次數(shù)限制（如適用）研究等。申請人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。

實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究應(yīng)采用至少三批試劑在實(shí)際儲存條件下保存至成品有效期后，選取多個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行產(chǎn)品穩(wěn)定性研究。

4.陽性判斷值

建議申請人納入一定數(shù)量的臨床樣本，結(jié)合產(chǎn)品特性可采用受試者工作特征（ROC）曲線或其他合理方法確定靶標(biāo)基因陽性判斷值。采用臨床來源的未經(jīng)治療的樣本，根據(jù)預(yù)期用途可納入目標(biāo)癌種、癌前病變、其他需鑒別診斷的惡性腫瘤、良性疾病等樣本進(jìn)行陽性判斷值研究，包括不同病理類型、不同的分期、不同甲基化比例及陽性判斷值附近的樣本，并對不同分期分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

提交內(nèi)標(biāo)基因的Ct值確定研究資料，可采用百分位數(shù)法確定內(nèi)標(biāo)基因的Ct值范圍。

申請人應(yīng)詳細(xì)闡述所采用方法的選擇依據(jù)，提交詳細(xì)研究方案、建立和驗(yàn)證設(shè)計(jì)、試驗(yàn)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析過程。明確所用樣本類型、樣本來源、樣本量估算的方法、樣本例數(shù)、臨床背景信息、基因甲基化確認(rèn)過程及數(shù)據(jù)等信息。臨床背景信息至少包括性別、年齡、臨床診斷信息、樣本來源機(jī)構(gòu)、檢測結(jié)果等信息。

如試劑判讀存在灰區(qū)，應(yīng)提交灰區(qū)范圍確定的研究資料。

5.其他資料

5.1主要原材料研究資料

主要原材料研究資料通常可包括核酸提取試劑/純化試劑、DNA轉(zhuǎn)化試劑、DNA捕獲序列（如有）、引物、探針、DNA聚合酶、UNG酶（如有）、dNTP等，此外還包括對照品/質(zhì)控品及企業(yè)參考品。申請人應(yīng)提交相關(guān)原材料的來源、選擇、制備方法的研究資料，質(zhì)量分析證書，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定和檢驗(yàn)資料。如為申請人自制，應(yīng)提供其詳細(xì)制備過程；如為外購，還應(yīng)提交生產(chǎn)商篩選資料以及生產(chǎn)商提供的原材料質(zhì)量檢定報(bào)告。

5.1.1核酸提取/純化試劑（如有）的主要組成、原理介紹及相關(guān)的驗(yàn)證資料。如產(chǎn)品不包含提取試劑，則需明確配套的核酸提取/純化試劑并提交相應(yīng)的提取效率驗(yàn)證資料。

5.1.2 DNA轉(zhuǎn)化試劑，明確主要組成、原理介紹及相關(guān)的驗(yàn)證資料。如產(chǎn)品不包含DNA轉(zhuǎn)化試劑，則需明確配套的DNA轉(zhuǎn)化試劑并提交相應(yīng)的轉(zhuǎn)化性能驗(yàn)證資料。

5.1.3 引物、探針

注冊申請人應(yīng)詳述Septin 9基因及內(nèi)標(biāo)基因（如適用）、引物、探針的設(shè)計(jì)原則，擴(kuò)增區(qū)段，檢測覆蓋的甲基化位點(diǎn)及其所在基因位置并提供選擇依據(jù)，同時(shí)應(yīng)提供捕獲序列、引物、探針核酸序列及其對應(yīng)的轉(zhuǎn)化前后基因序列及對應(yīng)關(guān)系，明確相應(yīng)的甲基化與非甲基化位點(diǎn)。提交詳細(xì)的篩選研究數(shù)據(jù)。

注冊申請人應(yīng)針對選定的引物探針原材料進(jìn)行質(zhì)量評價(jià)，一般包括：序列準(zhǔn)確度、純度（HPLC純等）、濃度、探針熒光標(biāo)記基團(tuán)的激發(fā)波長和發(fā)射波長（如適用）以及功能性試驗(yàn)等。注冊申請人應(yīng)明確評價(jià)方法，并依據(jù)評價(jià)結(jié)果建立合理的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

5.1.4酶

酶包括DNA聚合酶和/或尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG/UNG）等。申請人應(yīng)針對各種酶的活性進(jìn)行驗(yàn)證，提交功能性試驗(yàn)資料，并確定酶的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。如有降低Taq酶非特異性擴(kuò)增的措施，需詳細(xì)描述（例如采用熱啟動酶，Taq抗體等）。

DNA聚合酶應(yīng)具有DNA聚合酶活性，無核酸內(nèi)切酶活性，具有5’-3’外切酶活性（如適用），具熱穩(wěn)定性。UDG/UNG應(yīng)具有水解尿嘧啶糖苷鍵的活性，無核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性。

5.1.5脫氧核糖核苷三磷酸（dNTPs）

包括dATP、dCTP、dGTP、dTTP或dUTP；應(yīng)提交對其純度、濃度等的驗(yàn)證資料，以及功能性試驗(yàn)資料，并確定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

5.1.6對照品/質(zhì)控品

注冊申請人應(yīng)根據(jù)試劑檢測原理設(shè)置各種對照品（質(zhì)控品）來實(shí)現(xiàn)對產(chǎn)品整個(gè)反應(yīng)體系的有效監(jiān)控。陰性和陽性質(zhì)控品一般為一定濃度的甲基化陰性和陽性樣本。空白對照為不含靶核酸的溶液。對照品應(yīng)參與樣本核酸的平行提取。注冊申請人應(yīng)提供對照品原料選擇、制備、基因序列確認(rèn)、拷貝數(shù)及濃度確定過程、內(nèi)參基因與靶基因的比例確定等的詳細(xì)研究數(shù)據(jù)，并對其檢測結(jié)果做出明確的范圍要求。

注冊申請人應(yīng)對管內(nèi)抑制導(dǎo)致的假陰性結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制，明確所采取的具體措施（如設(shè)置內(nèi)標(biāo)等）、選擇依據(jù)，并提交相應(yīng)研究資料。

5.1.7企業(yè)參考品

企業(yè)參考品可包括Septin 9基因甲基化陽性參考品、Septin 9基因甲基化陰性參考品、精密度參考品、檢出限參考品。注冊申請人應(yīng)提交企業(yè)參考品的具體組成、原料來源、選擇、制備方法、陰陽性或甲基化狀態(tài)確認(rèn)、DNA濃度確認(rèn)以及檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)等的詳細(xì)研究資料。可采用臨床樣本或來源于細(xì)胞系片段化DNA樣本。Septin 9基因相應(yīng)位點(diǎn)甲基化陽性以及Septin 9基因相應(yīng)位點(diǎn)甲基化陰性樣本作為原料進(jìn)行參考品的制備，樣本應(yīng)明確其來源及甲基化狀態(tài)，并提交確認(rèn)資料。若采用細(xì)胞系，如為自制，需提交詳細(xì)的細(xì)胞系構(gòu)建資料及確認(rèn)資料；如為外購，應(yīng)提供生產(chǎn)商名稱、細(xì)胞系名稱、細(xì)胞類型、基因型信息及確認(rèn)資料，并提供生產(chǎn)商提供的質(zhì)檢報(bào)告。

陽性參考品應(yīng)包括不同DNA濃度以及一定 DNA 濃度下不同甲基化 Septin 9基因比率的樣本；

陰性參考品為一定 DNA 濃度下不含甲基化Septin 9 基因、含有低于檢出限的甲基化Septin 9基因、含有其他基因甲基化以及含有不同干擾和交叉反應(yīng)成分的樣本。

精密度參考品應(yīng)至少包括低、中高不同DNA濃度及在一定濃度下Septin 9基因甲基化陰性、低甲基化比例、中高甲基化比例的樣本。

檢出限參考品：應(yīng)包括DNA濃度和Septin 9基因甲基化比例均處于檢出限水平的樣本。

5.2 生產(chǎn)工藝

介紹產(chǎn)品的主要生產(chǎn)工藝，可用流程圖結(jié)合文字的方式表述，提交主要生產(chǎn)工藝的確定及優(yōu)化研究資料。